L'imagerie cellulaire vivante nécessite des microscopesqui minimisent la phototoxicité, maintiennent la viabilité cellulaire et fournissent une imagerie à haute résolution au fil du temps. Les choix courants comprennent:
1. Microscopes à fluorescence inversée:
Microscopes à large champ: équipés de commandes environnementales (température, CO₂, humidité) et des caméras sensibles (par exemple, SCMOS). Souvent associé à un contraste de phase ou à DIC (contraste d'interférence différentielle) pour l'imagerie sans étiquette.
Coup de rotation du disque: réduit le photoblanchiment avec un balayage plus rapide par rapport au confocal de balayage laser traditionnel. Idéal pour les processus dynamiques.
2. Microscopie à fluorescence de feuille lumineuse (LSFM):
Illumine uniquement le plan focal, réduisant considérablement l'exposition à la lumière et permettant une imagerie à long terme (par exemple, des heures à jours).
3. Microscopie à deux photons:
Utilise la lumière proche infrarouge pour la pénétration des tissus plus profonde et la phototoxicité réduite, adaptée à des échantillons épais comme les cultures 3D.
4. TIRF (fluorescence totale de réflexion interne):
Visualise les événements aumembrane cellulaire(par exemple, trafic de vésicules) en imaginant une section optique mince (~ 100 nm).
5. Microscopes super-résolution (par exemple, Sted, SIM):
Atteindre une résolution plus élevée mais nécessitent une optimisation minutieuse pour équilibrer l'exposition à la lumière et la santé des cellules.
6. Systèmes optimisés sur les cellules en direct:
Incorporer les chambres environnementales, l'optique adaptative et les détecteurs à faible luminosité (par exemple, les caméras EM-CCD).
Caractéristiques clés de l'imagerie en direct:
- Contrôle environnemental: maintient la température, le CO₂ et l'humidité.
- Acquisition rapide: minimise le flou de mouvement pour les processus dynamiques.
- Phototoxicité faible: les filtres, les sources de lumière LED ou l'éclairage de la feuille de lumière réduisent les dommages.
Choisissez en fonction des besoins de résolution, de la durée d'imagerie et de la sensibilité des échantillons.
